近日，迪安診斷運用高通量測序技術 (NGS) 分析了359份甲狀腺結節FNA活檢樣本的分子特征，揭示了NGS在甲狀腺結節良惡性鑒別和風險分層方面的價值。
這項隊列研究成果于2024年11月發表在國際期刊《Frontiers in Oncology》 (IF=3.5)，不僅深化了醫學界對甲狀腺疾病的理解，更為廣大患者帶來了福音，開啟了個性化診療的新篇章。
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研究背景 甲狀腺癌 (TC) 是一種內分泌疾病，主要有三種類型：分化型甲狀腺癌 (DTC)、甲狀腺髓樣癌 (MTC) 和未分化型甲狀腺癌 (ATC)。在中國，2005-2015年間，TC年齡標準化發病率 (ASIR) 從3.21/105增至9.61/105，TC年齡標準化死亡率 (ASMR) 從0.30/105增至0.35/105。 目前，高分辨率超聲應用于甲狀腺結節檢測，顯示甲狀腺結節發病率為20%-76%，其中10%-15%的結節存在惡變可能。甲狀腺細針穿刺 (FNA) 活檢通常與細胞病理學評估聯合運用，鑒別甲狀腺結節良惡性。但仍有20%-30%的甲狀腺結節細胞學檢查結果為不確定狀態。 現有指南表明，分子檢測可補充甲狀腺結節惡性風險評估。NGS多基因檢測與分子標志物相結合，并聯合細胞學診斷，提升了性質不確定甲狀腺結節的術前診斷水平，進而可減少不必要的手術。本研究旨在評估NGS多基因檢測在甲狀腺結節良惡性鑒別和風險分層方面發揮的作用。
研究方法 本研究入組359例甲狀腺結節患者。此前研究成果顯示，甲狀腺結節大小并未對FNA活檢樣本的細胞病理學診斷敏感性產生影響[1]。 基于此，本研究采用的樣本類型為FNA活檢樣本，同時進行細胞病理學評估和NGS多基因檢測。本研究共檢測10個基因 (BRAF、HRAS、KRAS、NRAS、TP53、RET、NTRK1、NTRK3、PAX8、THADA) 的單核苷酸變異/插入缺失變異 (SNV/InDel)、TERT基因的啟動區域以及甲狀腺癌中5個常見重排基因 (RET、NTRK1、NTRK3、PAX8、THADA)。 在18個月隨訪中，其中113名患者接受了甲狀腺結節手術切除治療，且進行了組織病理學檢測。最終診斷依據為組織病理學結果。同時，建立線性回歸模型，探究NGS多基因檢測與細胞病理學檢查聯合對甲狀腺結節良惡性的診斷性能。 研究結果 NGS結合細胞病理學提高了惡性結節的檢出率
相較于單獨的細胞病理學方法，NGS多基因檢測聯合細胞病理學，診斷敏感性從0.7245 (95% CI: 0.6289-0.8032) 提升至0.898 (95% CI: 0.8223-0.9437) (表1）。本研究中RAS變異導致特異性顯著下降，因為存在RAS變異的甲狀腺結節屬于中危組。然而，計算所得的ROC曲線下面積 (AUC) 為0.8303 (P＜0.001) （圖1）。
在113名接受甲狀腺結節手術切除的患者中，84名患者的結節直徑＜10mm，NGS聯合細胞病理學使診斷敏感性從0.75 (95% CI：0.6422-0.8337) 提高到了0.9211 (95% CI：0.8383-0.9633)。證實NGS聯合細胞病理學能夠顯著提高＜10mm甲狀腺結節術前診斷的準確性。綜上所述，與單一細胞病理學診斷相比，NGS聯合細胞病理學可顯著提高惡性甲狀腺結節的檢出率。
表1：細胞病理學以及NGS聯合細胞病理學的診斷效率 圖1：通過細胞病理學和NGS聯合細胞病理學確定甲狀腺結節良惡性的ROC曲線
甲狀腺結節不同分子特征的診斷意義 本研究分析了359個甲狀腺結節FNA活檢樣本的分子特征（表2），涵蓋了所有Bethesda分類。 136例患者攜帶BRAFV600E，其中79名接受手術治療并經組織病理學診斷均為甲狀腺乳頭狀癌 (PTC)，診斷敏感性為1（95%CI：0.9531-1）。因此，不管細胞病理學的Bethesda分類如何，NGS多基因檢測結果顯示為BRAFV600E變異，都建議臨床告知患者，其甲狀腺結節很可能是PTC。 5名甲狀腺結節患者攜帶已知甲狀腺癌惡性風險增加的分子特征，包括1例TERT啟動子變異，以及4例BRAF/RAS與其他基因共突變 (BRAFV600E+TP53、KRAS+TP53、HRAS+TERT、BRAFV600E+TERT)。這些患者中有4名接受手術治療并診斷為甲狀腺癌，包括2個PTC、1個甲狀腺濾泡癌 (FTC) 和1個分化型高級別甲狀腺癌 (DHGTC)。當檢測到上述任何高風險變異時，應提醒患者盡快安排手術切除，并考慮擴大手術范圍。 本研究在27例患者結節中檢測出RAS變異，其中10例接受手術治療，3名被診斷為PTC，7例為良性結節。顯示RAS突變的陽性預測值為0.3（95% CI：0.1078-0.6032），而單獨細胞病理學的陽性預測值為0.2（95% CI：0.0567-0.5098）。以上結果提示了僅基于RAS變異預測甲狀腺癌預后的局限性；因此，RAS變異被歸為中危組。臨床醫生應根據患者的其他臨床癥狀評估RAS變異患者是否手術或隨訪。 未手術患者中發現的其他致病變異包括RET激活變異、RET融合和TP53失活變異。一名攜帶RET激活變異的患者，其降鈣素水平升高，臨床判斷為甲狀腺髓樣癌 (MTC)。 183名患者的NGS檢測結果為臨床意義不確定的變異或者陰性。其中，20例 (10.93%) 接受手術，12例 (6.56%) 確診為甲狀腺癌，包括11例PTC和1例MTC。對于此類患者，臨床醫生可通過觀察其他臨床指標，確定是否需要手術干預或定期臨床評估。 表2：通過NGS多基因檢測分析的359個甲狀腺結節FNA活檢樣本的分子特征
研究小結 當前，甲狀腺結節分子特征研究旨在提高鑒別甲狀腺結節良惡性的能力，并預測其臨床病程。而對患者實施風險分層的進一步舉措是延長甲狀腺結節患者的隨訪期。 本研究明確了，攜帶BRAFV600E、TERT啟動子變異、BRAF/RAS與其他基因共突變，RET激活突變以及RET融合的甲狀腺結節屬于高危組。中危組包括RAS變異和TP53失活變異。NGS多基因檢測結果為臨床意義不明確的變異或陰性的結節歸為低危組。 本研究根據特定基因變異對甲狀腺結節的風險進行了分層和評估，可為患者提供更具個性化的診斷參考，揭示了NGS多基因檢測在對甲狀腺結節進行風險分層以及良惡性鑒別中，展現出的超出預期的診斷效能。 目前，迪安診斷臨床基因組中心自主研發的甲狀腺癌基因檢測產品，包括檢測11個基因的迪佳安?Basic和檢測116個基因的迪佳安?Plus。該類產品在揭示甲狀腺癌遺傳學基礎、輔助臨床精準區分甲狀腺結節性質、評估預后、指導個性化治療策略，以及遺傳性甲狀腺癌的早期篩查方面發揮了重要作用，體現了基因檢測技術在甲狀腺癌管理上的深度應用價值。 近年來，依托迪安診斷甲狀腺基因檢測產品，報道了全球首例甲狀腺癌ETV6-NTRK3 & NTRK3-AJUBA雙融合病例，擴展了NTRK基因融合頻譜，為患者術后復發提供了治療選擇[2]；同時，探討了NGS多基因檢測在識別甲狀腺微小乳頭狀癌低危或高?；颊咧械膽脙r值[3]。迪安診斷不斷提升產品力、技術力以及學術水平，不僅實現了患者個性化精準診療，也助力推動了客戶科研實力的升級與發展。 參考文獻 1. Zhang, F., Qin, L., et al. Diagnostic Significance of Ultrasound-Guided Fine-Needle Aspiration Biopsy and on-Site Assessment by Pathologists for Thyroid Micronodules. International Journal of General Medicine, 315-321. 2. Yu, Q. X., Zhao, W. J., Wang, H. Y., Zhang, L., Qin, L., Zhang, L., & Han, J. L. (2023). Case report: identification of a novel NTRK3-AJUBA fusion co-existing with ETV6-NTRK3 fusion in papillary thyroid carcinoma. Frontiers in Oncology, 13, 1123812. 3. Jin L, Zhou L, Wang J-B, Tao L, Lu X-X, Yan N, et al. Whether detection of gene mutations could identify low- or high-risk papillary thyroid microcarcinoma? Data from 393 cases using the next-generation sequencing. Int J Endocrinol. (2024). doi:10.1155/2024/2470721
